Dicas para usar enzimas

‌Tips para usar enzimas‌ inclui principalmente os seguintes aspectos:

‌ Condições da reação de controle ‌: A atividade das enzimas é afetada por fatores como temperatura, valor de pH e concentração de íons. Por exemplo, as condições ideais de reação para a enzima TG são pH 7. 0-8. 0 e temperatura 37 graus ‌. Para nuclease universal, o pH ideal é 8. 0, a temperatura da atividade mais alta é de 37 graus e a faixa de temperatura da atividade da enzima é 0 ~ 42 graus ‌.

Determine a dosagem‌: selecione a dose de enzima apropriada de acordo com o objetivo do experimento e o efeito desejado. Recomenda-se realizar primeiro um experimento em pequena escala, observar o efeito e depois ajustar a dose conforme necessário. Por exemplo, para o lisado celular eucariótico, geralmente adiciona 1ul, ou 500 unidades de nuclease, para cada 106 ~ 107 células‌.

Solution Solução de preparos: dissolver a enzima em um tampão apropriado, como Tris-HCl, PBS, etc. É recomendável usar um ambiente de operação estéril para evitar contaminação microbiana. A concentração e o volume da solução devem ser ajustados de acordo com as necessidades experimentais‌.

‌ Condições de armazenamento ‌: As enzimas devem ser armazenadas sob condições adequadas de temperatura e umidade e evitar a exposição a ambientes inadequados, como alta temperatura, umidade e luz. Por exemplo, o prazo de validade da nuclease universal é de 1 ano a 2-8 grau. Se for usado por mais de 1 semana após a abertura do pacote, é recomendável filtrar e esterilizar para evitar a contaminação microbiana. ‌
‌ Problemas comuns para lidar com ‌: Você pode encontrar alguns problemas durante o uso, como inibição da atividade enzimática e tempo prolongado de reação. Por exemplo, reagentes comuns como EDTA e cloridrato de guanidina têm um efeito inibitório na atividade das nucleases universais, e esses efeitos podem ser compensados pelo controle da faixa de concentração de inibidores e aumentando a concentração da enzima. ‌
Methods Métodos de ativação e remoção ‌: Para nucleases que precisam ser inativadas, condições extremas como NaOH de 100 mm e 70 graus por 30 minutos podem ser usadas. As nucleases podem ser removidas por cromatografia em troca de ânion, filtração em gel e outros métodos.